|
Mô tả quy trình CN/TB:
- Bước 1: tạo vector tái tổ hợp pDG364-CotB chứa gen mã hoá protein VP28 (pDG364-cotB-vp28) của virut gây bệnh đốm trắng bằng phương pháp nhân dòng gen đích vp28 vào vector pDG364-CotB.
- Bước 2: tạo chủng Bacillus subtilis tái tổ hợp chứa gen dung hợp CotB-VP28 bằng phương pháp cài nhập gen vào nhiễm sắc thể thông qua trao đổi chéo tương đồng tại vị trí gen amyE mã hoá amylase.
- Bước 3: nuôi cấy chủng CotB-VP28 để thu hồi sinh khối bào tử CotB-VP28 biểu hiện protein dung giữa VP28 và protein CotB của lớp vỏ áo ngoài bào tử.
- Bước 4: cô đặc dịch nuôi cấy bào tử CotB-VP28 sau đó giết chết/ bất hoạt bào tử CotB-VP28 nhưng vẫn đảm bảo tính trình diện kháng nguyên của VP28 trên bề mặt bào tử, sấy phun dịch cô đặc để thu được bột bào tử CotB-VP28 đậm đặc.
- Bước 5: kiểm định nồng độ bào tử CotB-VP28 bằng phương pháp đếm độ sống trên đĩa thạch có bổ sung kháng sinh, xác định đoạn gen đặc hiệu vp28 có trong bào tử bằng kỹ thuật PCR, sau đó kiểm tra mức độc biểu hiện của CotB-VP28 trên bào tử bằng kỹ thuật thẩm tách miễn dịch.
- Bước 6: pha loãng bào tử CotB-VP28 đậm đặc với tá dược theo tỷ lệ thích hợp để thu được nồng độ mong muốn (tuỳ nhà sản xuất, thường là ≥ 1 x 109 CFU/g), đóng gói và dán nhãn sản phẩm.
|