Phản ứng hóa học trên 5fC ở đây dựa trên phản ứng Friedlander, bao gồm cả nhóm 4 -amino và nhóm 5 -formyl trên cơ sở 5fC và một hợp chất methylene hoạt động có chứa chuỗi phụ (sidechain) trong phản ứng. Nhóm formyl trên 5fC phản ứng với methylene hoạt động thông qua quá trình ngưng tụ khử nước, sau đó là một chu kỳ nội phân tử của nhóm 5fC 4 -amino với chuỗi phụ của hợp chất methylene hoạt động. Phản ứng hai bước như vậy đảm bảo ghi nhãn chọn lọc cao trên 5fC. Các nhà nghiên cứu đã xác định thành công một số hóa chất thí điểm phản ứng dễ dàng với 5fC. Trong số các hóa chất này, 1,3-indandione (và các dẫn xuất) và malononitrile cung cấp hầu hết các tính năng độc đáo khi thử nghiệm. 5fC được dán nhãn sẽ trực tiếp đọc là Thymine thay vì Cytosine trong quá trình khuếch đại và giải trình tự PCR, do đó cung cấp cách đơn giản nhất để phát hiện 5fC. Dựa trên hai hóa chất này, các nhà nghiên cứu đã phát triển các phương pháp giải trình tự 5fC được gọi là fC-CET và CLEAVER-seq, được thiết kế cho các mẫu genome số lượng lớn và đơn bào, tương ứng. Họ cũng đã thiết kế các bộ dụng cụ chứa các hóa chất này để tạo điều kiện cho những người muốn phân tích 5fC trong các mẫu cần quan tâm khác nhau. Họ hy vọng hóa học và các phương pháp liên quan được báo cáo ở đây sẽ được ứng dụng rộng rãi hơn cả trong nghiên cứu khoa học cơ bản và sử dụng lâm sàng tiềm năng.